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低溫冰箱和程控速率冷凍儀在細(xì)胞凍存的操作步驟

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低溫冰箱和程控速率冷凍儀在細(xì)胞凍存的操作步驟:

1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞,用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來,懸浮生長的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中;
3. 離心1000rpm,5min;
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
5. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
6. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;

7. 凍存:

①利用已設(shè)定程序的程控速率冷凍儀,標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。

②也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃低溫冰箱2h ,然后放入-70℃低溫冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。


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