低溫冰箱和程控速率冷凍儀在細(xì)胞凍存的操作步驟：
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；
2. 取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞，用胰蛋白酶把單層生長的細(xì)胞消化下來，懸浮生長的細(xì)胞則直接將細(xì)胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；
7. 凍存：
①利用已設(shè)定程序的程控速率冷凍儀，標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。
②也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃低溫冰箱2h ，然后放入-70℃低溫冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
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